細胞培養(yǎng)的本質(zhì)是細胞克隆技術(shù)。原理就是盡可能給細胞提供類似于體內(nèi)的環(huán)境，在無菌條件下，給予適當?shù)臏囟群退釅A度以及細胞生長繁殖所必要的營養(yǎng)條件，使其能在體外維持正常的生長繁殖，并保持其結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)。

細胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用十分廣泛，基礎(chǔ)醫(yī)學研究，抗體制備，新藥篩選，基因工程等等都需要用到細胞培養(yǎng)技術(shù)。

但在日常的細胞實驗中，實驗者經(jīng)常會遇到一些問題，今天我們就這些常見的問題給出相應(yīng)的建議，希望對小伙伴們有所幫助。

貼壁細胞如何高效傳代？

貼壁生長的細胞，在培養(yǎng)瓶或者培養(yǎng)皿長至單層鋪滿的狀態(tài)后后，空間已基本上飽和，細胞生長、增殖受阻，為使其繼續(xù)擴增或生長，需要進行傳代（再培養(yǎng)）處理。同時，傳代培養(yǎng)也可用于細胞種的保存。不僅如此，各種細胞實驗也是以高效的細胞傳代為基礎(chǔ)的。

懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞則需經(jīng)消化等處理后才能分瓶。

一般使用胰蛋白酶，將貼壁細胞消化成成單個細胞，也可加入EDTA提高消化能力（EDTA 是一種二價離子的螯合劑，能抑制細胞膜上的Ca2+和Mg2+）。

常用的細胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA。

實驗時，先用吸去細胞培養(yǎng)上清，用PBS清洗細胞，棄掉洗滌液，重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(根據(jù)培養(yǎng)皿的大小不同，一般2-5ml消化液即可，以剛好鋪滿整個皿底為原則)，觀察細胞直到細胞變圓脫離瓶壁，此過程一般需要3-5分鐘，為了避免細胞成團，消化細胞的過程中不要拍打細胞瓶。對于特別難消化的細胞，可以加入胰酶EDTA 消化液后把細胞置于37°C 促進消化，細胞脫離瓶壁后，立刻加入含有血清的*培養(yǎng)基中止消化。

800-1000rpm，離心5分鐘，然后棄去中止用的培養(yǎng)基，加入適合的新的培養(yǎng)基輕輕混勻細胞，移入到新的培養(yǎng)瓶。傳代的比例視細胞類型而定。胰蛋白酶會對某些細胞的細胞膜產(chǎn)生損傷，對于這種類型的細胞，可用細胞刮輕輕刮下細胞，加入適量的培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻細胞，然后進行傳代培養(yǎng)。

細胞傳代的頻率為多久？

貼壁型的細胞的匯合度約為*的時候，需進行傳代操作。

當細胞以克隆的形式生長時，匯合度則達不到100%。對于該類型的細胞，達到或者接近最大密度的時候，即觀察不到細胞明顯擴增時，就需要進行傳代。

接觸抑制型細胞需要在細胞長滿之前傳代，避免產(chǎn)生細胞長滿后接觸抑制后產(chǎn)生性狀的改變。

懸浮型的細胞必須在細胞達到最大飽和密度之前傳代，懸浮細胞傳代時只需稀釋至合適的密度，讓細胞有充足的營養(yǎng)恢復(fù)到對數(shù)生長期。

如何處理腫瘤細胞株？

了解每株細胞可能產(chǎn)生的生物危害是很難的。

• 強烈推薦，所有的人類和其他靈長類生物的細胞在預(yù)防HIV和肝炎病毒的實驗條件下操作；

• 所有的操作必須在生物安全柜中操作，遵守生物安全柜使用規(guī)范；

• 操作過程中產(chǎn)生的廢液和廢儀器都要經(jīng)過清洗、酸處理等處理后才能丟棄。